Сінтэз нуклеінавых кіслот ажыццяўляецца з дапамогай цвёрдафазнага метаду трыгліцерыдаў сіялавага аміду, у выніку чаго 3'-канец ДНК імабілізуецца на цвёрдафазнай падкладцы, а нуклеатыды дадаюцца ў напрамку 3'-5', пакуль не будзе сінтэзаваны патрэбны фрагмент ДНК. .Гэта адрозніваецца ад сінтэзу ДНК ужываннем ДНК-палімеразы.
3'-канец першай асновы імабілізаваны на CPG падчас сінтэзу, 5'-OH наступнай асновы абаронены ды-п-талілтрытылавым ДМТ, амінагрупа на аснове абаронена бензойнай кіслатой і 3'-канец першай асновы. Затым -OH актывуецца амінафасфатным злучэннем.1 аснова 5 5'-OH з 1 асновы і 3'-OH наступнай асновы ўтвараюць трыгліцерыд фасфіту, які затым акісляецца ёдам да трыгліцерыду фасфату, ахоўнае сродак на другой аснове 5'-OH выдаляецца шляхам даданне дихлоруксусной кіслаты DM праходзіць па цыкле праз даданне наступнай асновы, і пасля сінтэзу ахоўны сродак на 5'-OH выдаляецца слабой кіслатой. Фрагмент адлучаецца ад цвёрдай смалы канцэнтраваным гідраксідам амонія, ахоўны сродак выдаляецца з асновы канцэнтраваным гідраксідам амонія пры награванні, гідраксід амонія выдаляюць, фрагмент сушаць у вакууме, а нуклеінавую кіслату чысцяць з дапамогай вадкаснай храматаграфіі або PAGE.
Этапы алігасінтэзу
Дэблакіроўка
The5-я канчатковая ахоўная група DMT выдаляецца шляхам дадання раствора TCA.
Актывацыя
Змешванне актыватара з алігануклеатыдным манамерам з адукацыяй актыўнага прамежкавага алігануклеатыднага манамера.
Счапленне
5-канцавая гідраксільная група рэагуе з актыўным прамежкавым алігануклеатыдам у рэакцыі антыгенератыўнай кандэнсацыі з адукацыяй няўстойлівай фасфітнай трыгліцерыднай сувязі.
Укупорка
Даданне закрываючага агента выконвае рэакцыю закрывання ацэтылявання з лішкам гідраксільных груп, якія не ўдзельнічаюць у рэакцыі кандэнсацыі.
Акісленне
Даданне раствора ёду, які змяшчае ваду, рэагуе з няўстойлівымі фасфітнымі сувязямі шляхам акіслення з адукацыяй стабільных трыгліцерыдных сувязяў фосфарнай кіслаты.
Расшчапленне цианоэтила
Прадукт нуклеінавай кіслаты пасля сінтэзу з даданнем раствора ДЭА для выдалення цианоэтильной групы з фасфатнай трыгліцерыднай сувязі.
Расшчапленне і зняцце абароны
Фрагменты нуклеінавых кіслот адшчапляюцца ад цвёрдафазнага носьбіта шляхам дадання канцэнтраванага раствора гідраксіду амонія і затым награваюцца для выдалення ахоўных груп з вадародных сувязяў асноў.
Час публікацыі: 21 лістапада 2022 г